以下文章实验数据由纳谱分析提供
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紫苏叶药材基本情况
紫苏叶（PerillaLeaf）为唇形科植物紫苏(Perillafrutescens(L.)Britt.)的叶或带嫩枝。紫苏是我国传统中草药之一，始载于《名医别录》，一年生草本，高60～90cm，主茎发达，茎圆角小棱，紫色或绿紫色；叶对生，叶片多皱缩卷曲、破碎，边缘具圆锯齿，长3～9.5cm，宽2～8cm，两面呈紫红色，气清香，味微辛。《本草纲目》中记载：紫苏，近世要药也。其味辛，入气分，其色紫，入血分；《本草汇言》中记述：紫苏，散寒气，清肺气，宽中气，安胎气，下结气，化痰气，乃治气之神药也。具有散寒解表、宣肺止咳、理气和中、安胎、解毒等功效，可健胃、发汗、止咳祛痰、利尿、净血、镇静，治疗外感风寒、头痛等病症。紫苏是国家卫生部首批颁布的既是食品又是药品的60种物品之一，原产于中国，已有多年的栽培历史，主要分布于华北、华中、华南、西南等地区。因其对土壤、环境条件要求不严，适应性强，现在印度、缅甸、日本、朝鲜、韩国等国家也有种植，共有１个种和３个变种，即紫苏（包括白苏和紫苏，栽培型）、耳齿变种、野生紫苏和回回苏（皱紫苏）。
实验背景
紫苏茎叶具特异芳香，从中可提取紫苏挥发油，含紫苏醛、紫苏醇、薄荷酮、薄荷醇、丁香油酚、白苏烯酮等百余种化学成分，是紫苏发挥药效的重要成分，具有抑菌、抗抑郁、抗炎、抗氧化、解热等药理活性。年版《中国药典》（一部）规定，紫苏叶总挥发油含量不得少于0.40％（mL/g）。学界研究了紫苏叶挥发性成分的构成，并根据紫苏叶所含挥发性成分的主要类型和含量差异，将其分为紫苏醛型（PA）、紫苏酮型（PK）、柠檬醛型（C）、芳香族化合物（PP）、胡椒烯酮型（PT）、香薷酮型（EK）等6种化学型。
自版中国药典四部农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法，部分中药检测企业反馈紫苏叶药材由于含有酚类、挥发油类等，基质效应较为严重。因此，建立一种适用于紫苏叶基质的前处理方法具有重要的实际应用价值。
★
适用范围
★
本方法参考中国药典版第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。
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实验步骤
★
一
对照品溶液的制备
1.1混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；
1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。
1.3空白基质溶液的制备
取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C水浴浓缩至约0.6mL，分别加人混合对照品溶液l0μL、20μL、50μL、μL、μL、μL，加乙腈稀释至lmL，涡旋混匀，即得。
二
供试品溶液的制备
2.1提取
称取5g紫苏叶样品，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，待净化。
三
净化
SPE柱：SelectCoreHLB-A中药农残专用固相萃取柱（mg/6mL）
净化1：量取直接提取法制备的供试品溶液3mL，过SelectCoreHLB-A中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。如净化1方式磺隆类成分回收率较低，可以再结合下面的净化2的回收率数据；
净化2：量取直接提取法制备的供试品溶液5mL，过SelectCoreHLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀；
GC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3mL内标溶液，混匀，过PTFE膜，上机分析。
LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3mL水，混匀，过PTFE膜，上机分析。
四
处理后溶液的颜色比对
紫苏叶提取液过HLB-A柱
紫苏叶提取液过HLB柱
由上图可以看出，紫苏叶提取液经过SelectCoreHLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规HLB柱净化后样品颜色较深。
五
高效液相色谱-串联质谱法
（岛津LC-MS）
色谱条件
色谱柱：ChromCoreC18-MSPesticides中药农残专用柱(2.1×mm，2.6μm)
流动相：
A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）
B：乙腈/0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95/5
梯度：
时间
（min）
流速
（mL/min）
流动相A
（%）
流动相B
（%）
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
14
0.3
0
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30
流速:0.3mL/min
柱温:40℃
进样量:1μL
质谱条件
离子源:电喷雾离子源（Electrosprayionization，ESI）正离子扫描
监测方式：多反应监测（MultipleReactionMonitoring，MRM）
离子源接口电压：4.5kV
雾化气：氮气3.0L/min
加热气：干燥空气10.0L/min
DL温度：℃
加热模块温度：℃
接口温度：℃
干燥气：NL/min
图1：ChromCoreC18-MSPesticides色谱柱30种农药标准品（以甲胺磷计0.μg/ml）的典型谱图
图2：紫苏叶空白基质加标的典型谱图（SelectCoreHLB净化）
图3：紫苏叶空白基质加标的典型谱图（SelectCoreHLB-A净化）
从以上紫苏叶基质加标LC/MS/MS图对比来看，常规HLB处理后的加标样品的谱图有很多的基质干扰，而HLB-A处理后的加标样品的谱图基质干扰去除较好，基质效应影响更小，让分析检测结果更为准确。
六
气相色谱-串联质谱法
（岛津GC-MS）
色谱条件
色谱柱：DB-17MS，30m×0.25mm，0.25μm;
进样口温度：℃；
升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至℃；再以2℃/min升温至℃，最后以15℃/min升温至℃，保持6min；
载气：高纯氦气（纯度99.%）；
进样方式：不分流进样；
恒压模式：kPa；
进样量：1μL。
质谱条件
电离方式：电子轰击电离源（EI）；
电离能量：70Ev；
传输线温度：℃；
离子源温度：℃；
监测方式：多反应检测模式（MRM）；
溶剂延迟：10.0min。
表1紫苏叶中33种农药残留的的测定添加回收结果（%）
农残成分
回收率
农残成分
回收率
甲胺磷
98.1%
甲磺隆
96.5%
甲基对硫磷
98.3%
氯磺隆
98.7%
对硫磷
76.5%
胺苯磺隆
91.5%
久效磷
94.1%
甲拌磷
90.5%
磷胺
97.2%
甲拌磷砜
86.9%
α-六六六
95.5%
甲拌磷亚砜
.9%
β-六六六
93.3%
甲基异柳磷
98.1%
γ-六六六
94.5%
内吸磷-O
92.0%
δ-六六六
95.7%
内吸磷-S
91.9%
2,4-滴滴涕
65.4%
克百威
99.9%
4,4-滴滴滴
80.5%
3-羟基克百威
91.5%
4,4-滴滴涕
60.7%
涕灭威
95.7%
4,4-滴滴伊
66.9%
涕灭威砜
%
杀虫脒
76.2%
涕灭威亚砜
95.6%
除草醚
70.2%
灭线磷
89.7%
艾氏剂
65.6%
氯唑磷
98.8%
狄氏剂
67.6%
水胺硫磷
65.5%
苯线磷
.4%
α-硫丹
71.6%
苯线磷砜
92.3%
β-硫丹
88%
苯线磷亚砜
90.4%
硫丹硫酸酯
84.6%
地虫硫磷
98.3%
氟虫腈
.8%
硫线磷
92.9%
氟虫腈砜
.6%
蝇毒磷
96.9%
氟虫腈亚砜
.8%
治螟磷
98.9%
氟甲腈
.8%
特丁硫磷
89.1%
o,p-三氯杀螨醇
76.4%
特丁硫磷砜
.4%
p,p-三氯杀螨醇
71.8%
特丁硫磷亚砜
92.6%
硫环磷
97.9%
甲基硫环磷
95.1%
__注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求（回收率红色字体代表的是5mL样品过柱）。
七
紫苏叶过HLB与HLB-ASPE柱的
部分农残基质响应的区别
（左边为HLB，右边为HLB-A）
涕灭威亚砜
甲胺磷
甲基硫环磷
甲拌磷砜
4,4-DDT
八
实验讨论
通过以上实验数据比对，可以看出，SelectCoreHLB-A中药农残专用固相萃取柱，针对紫苏叶大量色素成分和少量的挥发油成分去除效果良好，这样，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的涕灭威亚砜、甲胺磷、甲拌磷砜和DDT等农残成分的检测灵敏度下降、基质干扰导致的定量不准确等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，过柱时间花费不到5分钟，不仅操作便捷，对于33种农残成分的峰形均有明显改善。
END
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